Desenvolvimento de metodologia para contagem de cinco estirpes de bactérias veiculadas em substrato sólido

Resumo

Inoculantes considerados multifuncionais podem contribuir par ao crescimento vegetal e simultaneamente, para a proteção de cultivos.  Bactérias promotoras de crescimento e/ou biocontroladoras de patógenos de cana foram selecionadas para atuar como uma comunidade sintética (CS) baseado na somatória de suas funcionalidades individuais.  Para imobilizar as cinco estirpes pré-selecionadas, foram feitos testes visando a sua sobrevivência em diferentes substratos sólidos.  As estirpes bacterianas foram quatro diazotróficas Gram-negativas: Gluconacetobacter diazotrophicus (Gd-BR 11281), Herbaspirillum seropedicae (Hs-BR 11335), Paraburkholderia tropica (Pt-BR 11366) e Nitrospirillum amazonense (Na-BR 11145), e uma Gram-positiva: Bacillus velezensis (Bv-LMC44a). Quatro substratos foram testados: fibra de coco, bagaço de cana triturado, turfa e vermiculita. Todos foram umedecidos e autoclavados a 121 ^oC por 20 min (duas vezes). A avaliação da sobrevivência das estirpes foi feita por dois métodos: método de espalhamento em placa de meio sólido (spread plate) usando quatro meios de cultivo: LGI (Na-BR11145), LGI-P (Gd-BR11281 e Pt-BR11366), NFB 3 x indicador (Hs-BR11335), SYP com indicador verde de bromocresol (Bv-LMC44a); e contagem do número mais provável (NMP) utilizando meios três diferentes meios semissólido sem adição de nitrogênio (JNFb, LGI e LGI-P caldo) apenas para as estirpes diazotróficas, além de medir o pH final.  A seleção de meios de cultivo propiciou a contagem tanto utilizando alíquota de 0,1 mL nas placas, como a aplicação de microgota (10 µL), para as quatro diazotróficas.  O Bv-LMC44a apresentou crescimento rápido e a contagem só é efetiva até 12 h após a inoculação de 100 µL no espalhamento, não se adaptando à contagem por microgota. Além disto o meio selecionado foi o SYP com 20 g L^-1 de agar, visando conter o crescimento e formação de colônia.  Os testes feitos com meio semissólido não permitiram a diferenciação de Gd-BR11281 da Pt-BR11366, sendo necessário posterior separação usando placas com meio sólido Batata-P.  Enquanto aplicadas de forma individualizada, as cinco estirpes mantiveram número superior a 10⁸ UFC mL^-1 (espalhamento) utilizando bagaço de cana, fibra de coco, e vermiculita; com exceção de Gd-BR11281 após 30 dias de incubação com menor pH observado na fibra de coco (média 5,78).  Bv-LMC44a mantém populações 10 vezes menores independendo do substrato