Isolamento, caracterização e identificação de linhagens de fungos endofíticos de raízes e lignolíticos

Resumo

Fungos endofíticos de raízes, entre eles ectomicorrízicos, conferem benefícios a planta hospedeira, como proteção de doenças, produção de fitohormônios e melhora na absorção de nutrientes. Fungos lignolíticos compreendem saprófitos de serapilheira (celulose, lignina e hemicelulose) sendo de interesse na compostagem, biorremediação e produção de enzimas. O presente trabalho teve o objetivo de isolar linhagens de fungos endofíticos de raízes e lignolíticos, preservar por métodos de longa duração e caracterizar os isolados visando sua identificação taxonômica para a futura inserção ao acervo da Coleção de Fungos da Embrapa Agrobiologia (COFMEA) pertencente ao Centro de Recursos Biológicos Johanna Döbereiner (CRB-JD). Para o isolamento foi utilizado o meio “Modified Melin-Norkrans” com antibióticos e para a preservação o meio “Malt Extract-Agar” sem antibióticos. Os métodos de preservação utilizados foram Castellani, Criopreservação e Liofilização. Para caracterização foram tomadas georeferência, fotos do momento da coleta e da frente e verso das colônias isoladas e montada lâminas de microscopia permanentes do micélio. Para identificação foi extraído o DNA de micélio e amplificado por PCR (primers NS1short e RCA95m) o operon rDNA, para futuro sequenciamento. Foram obtidos até o momento 88 isolados fúngicos, cada um preservado com 10 tubos em Castellani e 2 tubos criopreservados a -80 °C. Trinta isolados foram já preservados por liofilização com 5 tubos de cada. O micélio de 68 linhagens já foram submetidos a extração de DNA, amplificação e purificação do rDNA. No futuro, ao finalizar as etapas de preservação, caracterização e identificação, as linhagens serão depositadas na COFMEA, recebendo o código da COFMEA, composto pela letra A seguida de uma numeração sequencial, serão catalogadas na base de dados Alelomicro, recebendo o código BRM, e serão cadastradas no Sistema Nacional de Gestão do Patrimônio Genético e do Conhecimento Tradicional Associado (SisGen).